A Novel HPLC Column Switching Method Coupled to ICP-MS/QTOF for the First Determination of Selenoprotein P (SELENOP) in Human Breast Milk

Abstract

En este trabajo describimos por primera vez la presencia de selenoproteína P en la leche materna humana. Para ello, se ha desarrollado un nuevo método analítico basado en un sistema de intercambio de columnas bidimensional, que consta de tres columnas de exclusión por tamaño y una columna de afinidad acopladas a un espectrofotómetro de masas con plasma acoplado inductivamente (ICP-MS). El método combina la cuantificación precisa de selenoproteínas y selenometabolitos mediante dilución isotópica inespecífica de especies ICP-MS, con una identificación inequívoca mediante espectrofotómetro de masas de cuadrupolo-tiempo de vuelo. Se identificaron varios selenopéptidos, que contienen el aminoácido selenocisteína (U, SeCys), después de la digestión tríptica seguida de su separación. Los resultados revelan que la concentración relativa de selenio en el calostro sigue el orden: glutatión peroxidasa (GPX) ≈ selenoproteína P (SELENOP) > selenocistamina (SeCA) > otros selenometabolitos (SeMB), en contraste con los trabajos publicados anteriormente (GPX > SeCA > selenocistina > selenometionina). Se determinó una concentración media de 20,1 ± 1,0 ng Se g−1 como SELENOP (1,45 μg SELENOP/g) en el calostro (31% del selenio total).